Jaminan Kualitas Media

Media pertumbuhan adalah bahan yang paling penting dalam pengujian dan perhitungan mikroorganisme. Oleh karena itu, jaminan kualitas lebih ditekankan kepada persyaratan media pertumbuhan ini. Berbagai parameter yang berkaitan dengan kualitas media diantaranya adalah ketebalan agar (volume media), penampakan warna media, homogenitas media, konsistensi gel media, kandungan air media dan pH media. Selain itu beberapa hal berikut juga sebaiknya harus dicek yaitu retakan pada cawan atau botol, informasi pelabelan, waktu kedaluwarsa media jadi, kemiringan atau ketidakrataan media, kontaminasi, pembentukan kristal pada permukaan (akibat pembekuan), gelembung dan adanya media yang berada pada tepian cawan atau tabung (akibat penuangan yang tidak baik). Sedangkan APHA, AWWA, & WEF SM 9020 (2005) mensyaratkan beberapa pengecekan yang diperlukan dalam jaminan kualitas media yaitu sterilitas, nilai pH, penampakan, recovery dan kinerja media dengan kontrol kultur positif dan negatif (hal. 4).

1. Pegecekan sterilitas media

Sterilitas diperiksa sebelum penggunaan media pertama kali dengan jumlah minimal satu cawan/tabung setiap batch pebuatan (lot pembelian) atau ditentukan jumlahnya (misalnya 1-4 % dari jumlah total batch). Sampel media tersebut kemudian diinkubasi dengan suhu yang sesuai (misalnya 48 °C untuk coliform). Jika terdapat kontaminasi maka media sebaiknya harus dbuang dan data yang dihasilkan dari batch tesebut tidak valid. Sampel sebaiknya diambil kembali dan dianalisis ulang (APHA, AWWA, & WEF SM 9020, 2005, hal. 17). Pengambilan sampel media untuk pengencekan ini sebaiknya dilakukan secara acak atau media yang besar kemungkinannya untuk terjadi kontaminasi. Misalnya media agar yang saat penuangan dan pengeringannya berada paling pinggir luar dari meja kerja LAF. Umumnya media siap pakai tidak disimpan begitu saja tanpa pelindung dalam refrigerator, melainkan menggunakan suatu pembungkus atau penyekat, misalnya plastik steril. Untuk menjamin bahwa tidak ada risiko kontaminasi dari pembungkus tersebut, maka bungkus steril dapat diikutsertakan dalam pengujian sterilitas.

2. Pengujian kinerja media

Media yang digunakan dalam analisis sebaiknya dilakukan pengujian terlebih dahulu untuk mengetahui kinerjanya walaupun syarat lainnya telah memenuhi ketentuan. Pengujian ini dimaksudkan untuk memverifikasi kualitas media setelah dibuat menggunakan mikroorganisme kontrol yang sesuai dan kondisi yang diketahui. Pengujian ini diperlukan untuk setiap batch pembuatan media rutin. Selain itu disarankan juga pada saat kedatangan media baru untuk pengecekan kualitasnya atau jika media yang dipakai meragukan, misalnya terpaksa menggunakan media kering kedaluwarsa dan telah mengalami perubahan fisik.

Secara umum setiap batch media diharuskan untuk dilakukan pengecekan menggunakan kultur uji positif dan negatif. Kultur uji positif adalah mikroorganisme target atau yang diinginkan tumbuh dari media tersebut, sedangkan kultur uji negatif adalah mikroorganisme yang tidak diinginkan dan akan dihambat pertumbuhannya. Jika media yang dipakai adalah media non-selektif maka pengujian kontrol uji negatif tidak perlu dilakukan. Jumlah media yang diuji setiap batch-nya adalah minimal satu cawan/tabung. Sebaiknya penginokulasian media dengan kultur uji ini dilakukan setelah kegiatan analisis selesai dan secara terpisah (berbeda ruang) supaya media enumerasi tidak berisiko terkontaminasi. Daftar kultur positif dan negatif untuk beberapa pengujian mikrobiologi dapat dilihat pada Tabel 1, sedangkan untuk setiap media secara spesifik terdapat pada Tabel 2 (kultur positif adalah kultur yang digunakan untuk produktivitas dan kultur negatif untuk selektivitas).

Gambar 1. Ilustrasi pemeriksaan sterilitas dan kinerja media secara umum yang dilakukan pertama kali sebelum media digunakan. Diambil dari dokumentasi pribadi.

Tabel 1. Kultur kontrol uji yang disarankan untuk beberapa pengujian mikrobiologi. Kultur kontrol sebaiknya menggunakan strain ATCC yang sesuai. Diadaptasi dari “SM 9020 Quality assurance/quality control”, oleh APHA, AWWA, & WEF, 2005, hal. 17.

Kelompok yang diuji	Kultur kontrol
Kelompok yang diuji	Positif	Negatif
Total coliform	Escherichia coli	Staphylococcus aureus^a
	Enterobacter aerogenes^b	Proteus vulgaris^c
	Klebsiella pneumoniae (ATCC 4352)	Pseudomonas aeruginosa^a
Fecal coliform	Escherichia coli	Enterobacter aerogenes
Fecal coliform	Klebsiella pneumoniae (termotoleran)^d
Escherichia coli	Escherichia coli (strain MUG positif)	Enterobacter aerogenes
Escherichia coli		Klebsiella pneumoniae (termotoleran)
Enterococci ^e	Enterococcus faecalis	Staphylococcus aureus^f
Enterococci ^e	Enterococcus faecium	Escherichia coli^g
^a bukan pemfermentasi laktosa. ^b memfermentasi laktosa, tetapi umumnya tidak termotoleran. ^c bukan pemfermentasi laktosa, menggunakan laktosa terhidrolisis, menandakan media yang overcooked. ^d memfermentasi laktosa tetapi tidak menghidrolisis MUG. ^e jangan menggunakan strain yang berhubungan dekat dengan streptococcus sebagai kontrol positif. ^f sensitif kepada media sodium nalidixic. ^g sensitif terhadap sodium azide dalam media.

Secara khusus ISO 11133 (2014) mensyaratkan penambahan perhitungan beberapa parameter untuk penentuan kinerja media setiap batch-nya. Pada prinsipnya perhitungan ini adalah sama dengan pengecekan menggunakan kontrol uji diatas, tetapi dengan prosedur lebih rinci. Parameter tersebut adalah produktivitas, selektivitas dan spesifisitas yang digunakan untuk pengujian media padat atau cair. Pengertian produktivitas media adalah tingkat recovery dari mikroorganisme target pada media pertumbuhan dalam kondisi yang diketahui. Selektivitas media adalah tingkat penghambatan terhadap mikroorganisme non-target (yang tidak diinginkan) pada media selektif pada kondisi yang diketahui. Spesifisitas media adalah pertunjukan pada kondisi yang diketahui bahwa mikroorganisme non-target tidak menunjukkan karakteristik visual yang sama dengan mikroorganisme target (ISO 11133, 2014, hal. 2-3). Parameter ini kemudian digunakan sebagai penentu apakah batch media tersebut dapat diterima atau tidak dengan persyaratan spesifik untuk setiap jenis media seperti yang dijabarkan pada pada Tabel 2. Pengujian ini pada konsepnya serupa dengan Growth Promotion Test (GPT).

Tabel 2. Persyaratan kinerja dan mikroorganisme uji yang digunakan pada berbagai jenis media yang digunakan pada pengujian mikrobiologi pangan. Umumnya media ini terdapat pada metode ISO untuk pangan. Diadaptasi dari “ISO 11133: 2014 Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and performance testing of culture media”, oleh ISO, 2014, Annex E.

Media	Mikroorganisme	Fungsi ^e	Inkubasi	Strain kontrol	No.WDCM ^c	Media ref.	Met^f	Kriteria
Media selektif untuk enumerasi
ALOA (Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti)	Listeria monocytogenes	Pr	(44 ± 4) jam/ (37 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 4b^a	00021^b	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Pr		Listeria monocytogenes 1/2a^a	00109	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl		Escherichia coli^d	00012/00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp		Listeria innocua	00017	–	Kl	–
BP (Baird-Parker agar)	Staphylococci koagulase positif	Pr	(24 ± 2) – (48 ± 2) jam /(37 ± °1) °C	Staphylococcus aureus	00034^b,00032	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl	(48 ± 2) jam/ (37 ± 1) °C	Escherichia coli^d	00012,00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/ (37 ± 1) °C	Staphylococcus saprophyticus	00159^b	–	Kl	–
		Sp	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/ (37 ± 1) °C	Staphylococcus epidermidis	00036	–	Kl	–
BGBLB (Brilliant green lactose bile broth)	Coliforms	Pr	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(30 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b,00013	–	Kl	Turbiditas (2) dan gas di tabung Durham
		Pr		Citrobacter freundii	00006	–	Kl	Turbiditas (2) dan gas di tabung Durham
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009, 00087	–	Kl	Inhibisi sebagian tanpa produksi gas
CFC (Cephalothin fucidin cetrimide agar)	Pseudomonas spp.	Pr	(44 ± 4) jam/ (25 ± 1) °C	Pseudomonas fluorescens	00115^b	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Pr		Pseudomonas fragi	00116	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl		Escherichia coli^d	00012, 00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
DG18 (Dichloran glycerol agar)	Yeasts and moulds	Pr	5 hari/ (25 ± 1) °C	Saccharomyces cerevisiae	00058^b	SDA	Kn	P_R ≥ 0,5
				Wallemia sebi	00182^b
				Aspergillus restrictus	00183
				Eurotium rubrum	00184
		Sl		Escherichia coli	00012/ 00013^g	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
		Sl		Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
DRBC (Dichloran-rose bengal chloramphenicol agar)	Yeasts and moulds	Pr	5 hari/ (25 ± 1) °C	Saccharomyces cerevisiae	00058^b	SDA	Kn	P_R ≥ 0,5
				Aspergillus brasiliensis	00053^b
				Candida albicans	00054
				Mucor racemosus	00181
		Sl		Escherichia coli	00012/ 00013^g	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
		Sl		Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
EC (EC broth)	Escherichia coli	Pr	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(44 ± 1) °C	Escherichia coli	00012b,00013	–	Kl	Turbiditas (2) dan gas di tabung Durham
EC (EC broth)	Escherichia coli	Sl	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(44 ± 1) °C	Pseudomonas aeruginosa	00025	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
IS (“TS”) (Iron sulfite agar (“Tryptose sulfite agar”))	Bakteri pereduksi sulfat	Pr	(24 ± 3)-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C atmosfer anaerobik	Clostridium perfringens	00007^b,00080	TSA atau media non-selektif lain untuk anaerob	Kn	P_R ≥ 0,5
IS (“TS”) (Iron sulfite agar (“Tryptose sulfite agar”))	Bakteri pereduksi sulfat	Sp	(24 ± 3)-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C atmosfer anaerobik	Escherichia coli^d	00012, 00013	–	Kl	–
LST (Lauryl sulfate broth, lauryl tryptose broth)	Coliforms	Pr	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(30 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b, 00013	–	Kl	Turbiditas (2) dan gas di tabung Durham
		Pr		Citrobacter freundii	00006	–	Kl	Turbiditas (2) dan gas di tabung Durham
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009,00087	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
	Escherichia coli	Pr	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b, 00013	–	Kl	Turbiditas (2) dan gas di tabung Durham
	Escherichia coli	Sl	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Enterococcus faecalis^d	00009, 00087	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
mCCDA (Modified charcoal cefoperazone deoxycholate agar)	Campylobacter	Pr	(44 ± 4) jam/(41,5 ± 1) °C atmosfer mikroaerobik	Campylobacter jejuni	00156^b, 00005	Blood agar	Kn	P_R ≥ 0,5
		Pr		Campylobacter coli	00004	Blood agar	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl		Escherichia colid	00012/ 00013	–	Kl	Total atau parsial inhibisi (0-1)
		Sl		Staphylococcus aureus	00034	–	Kl	Total inhibisi (0)
MRS (de Man, Rogosa and Sharpe agar)	Bakteri asam laktat	Pr	(72 ± 3) jam/(30 ± 1) °C	Lactobacillus sakei	00015^b	Batch MRS yang telah divalidasi	Kn	P_R ≥ 0,7
				Lactococcus lactis	00016^b
				Pediococcus pentosaceus	00158
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	–
		Sl		Bacillus cereus	00001	–	Kl	–
MYP (Mannitol egg yolk polymyxin agar)	Bacillus cereus	Pr	(24 ± 3)-(44 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Bacillus cereus	00001	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl	(44 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp	(44 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003	–	Kl	–
RPFA (Rabbit plasma fibrinogen agar)	Staphylococci koagulase positif	Pr	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Staphylococcus aureus	00034^b,00032	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl	(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli^d	00012/00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Staphylococcus saprophyticus	00159^b	–	Kl	–
		Sp	(24 ± 2)-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Staphylococcus epidermidis	00036	–	Kl	–
PPA (Penicillin and pimaricin agar)	Pseudomonas spp.	Pr	(48 ± 2) jam/(25 ± 1) °C	Pseudomonas fluorescens	00115^b	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Pr		Pseudomonas aeruginosa	00025	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
TBX (Tryptone bile X-glucuronide agar)	E. coli positif β-d-Glucuronidase	Pr	(21 ± 3) jam/(44 ± 1) °C	Escherichia coli^h	00012^d, 00013^d, 00202^b	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009, 00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp		Citrobacter freundii	00006^b	–	Kl	–
		Sp		Pseudomonas aeruginosa	00025	–	Kl	–
TSC/SC (Sulfite cycloserine agar/tryptose sulphite cycloserine agar without egg yolk)	Clostridium perfringens	Pr	(20 ± 2) jam/(37 ± 1) °C atmosfer anaerobik	Clostridium perfringens	00007^b,00080	TSA atau media non-selektif lain untuk anaerob	Kn	P_R ≥ 0,5
	Clostridium perfringens	Sl	(20 ± 2) jam/(37 ± 1) °C atmosfer anaerobik	Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
VRBG (Violet red bile glucose agar)	Enterobacteriaceae	Pr	(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b, 00013	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
				Salmonella Typhimurium^d,i	00031
				Salmonella Enteritidis^d,i	00030
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009,00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
VRBL (Violet red bile lactose agar)	Coliforms	Pr	(24 ± 2) jam/(30 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b,00013	TSA	Kn	P_R ≥ 0,5
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009, 00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp		Pseudomonas aeruginosa	00025		Kl	–
Media non-selektif untuk enumerasi
PCA,MPCA (Plate count agar)	Hitungan koloni	Pr	(72 ± 3) jam/(30 ± 1) °C	Bacillus subtilis subsp.spizizenii	00003^b	TSA	Kn	P_R ≥ 0,7
				Escherichia coli	00012^b, 00013
				Staphylococcus aureus	00034
Media selektif untuk enrichment
Bolton broth	Campylobacter	Pr	(5 ± 1) jam/(37 ± 1) °C lalu (44 ± 4) jam/(41,5 ± 1) °C atmosfer mikroaerobik	Campylobacter jejunid	00156/00005	–	Kl	>10 koloni pada mCCDA
				+ Escherichia colid	00012/00013
				+ Proteus mirabilis	00023
				Campylobacter coli	00004
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Proteus mirabilis	00023
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
		Sl		Proteus mirabilis	00023	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
EE (Buffered brilliant green bile glucose broth)	Enterobacteriaceae	Pr	(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b,00013	–	Kl	>10 koloni pada VRBG
				+ Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087
				Salmonella Typhimurium^d,i	00031
				Salmonella Enteritidis^d,i	00030
				+ Enterococcus faecalis^d	00009/00087
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
Fraser broth	Listeria monocytogenes	Pr	(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 4b^a	00021^b	–	Kl	>10 koloni pada ALOA
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087
				Listeria monocytogenes 1/2a^a	00109
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	<100 koloni pada TSA
Giolitti Cantoni	Staphylococci koagulase positif	Pr	(24 ± 2) jam-(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Staphylococcus aureus	00034^b	–	Kl	>10 koloni pada Baird Parker atau RPFA
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				Staphylococcus aureus	00032
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
		Sl	(48 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli^d	00012/ 00014	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
Half-Fraser broth	Listeria monocytogenes	Pr	(24 ± 2) jam/(30 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 4b^a	00021^b	–	Kl	>10 koloni pada ALOA
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087
				Listeria monocytogenes 1/2a^a	00109
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	<100 koloni pada TSA
ITC (Irgasan, ticarcillin chlorate broth)	Yersinia enterocolitica	Pr	(44 ± 4) jam/(25 ± 1) °C	Yersinia enterocolitica	00038^b	–	Kl	>10 koloni pada CIN atau SSDC
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Pseudomonas aeruginosa	00025
				Yersinia enterocolitica	00160
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Pseudomonas aeruginosa	00025
		Sl		Pseudomonas aeruginosa	00025	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
		Sl		Proteus mirabilis	00023	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
MKTTn (Muller-Kauffmann tetrathionate novobiocin broth)	Salmonella	Pr	(24 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Salmonella Typhimurium^d,i	00031	–	Kl	>10 koloni pada XLD atau media lain
				Salmonella Enteritidis^d,i	00030
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Pseudomonas aeruginosa	00025
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	<10 koloni pada TSA
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	<10 koloni pada TSA
MSRV^k(Modified semi-solid Rappaport-Vassiliadis medium)	Salmonella	Pr	2 × (24 ± 3) jam/(41,5 ± 1) °C	Salmonella Typhimurium^d,i	00031	–	Kl	Zona keruh abu-abu-putih yang melebar dari jatuhan inokulasi. Setelah 24-48 jam, zona keruh akan berpindah ke seluruh cawan.
		Pr		Salmonella Enteritidis^d,i	00030	–	Kl
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Kemungkinan tumbuh di tempat jatuhan inokulasi, tanpa zona keruh
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
MMG (Minerals-modified glutamate medium)	E. coli positif β-d-Glucuronidase	Pr	(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b,00013	–	Kl	Produksi asam
MMG (Minerals-modified glutamate medium)	E. coli positif β-d-Glucuronidase	Sl	(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	Tidak ada pertumbuhan
PSB (Peptone, sorbitol and bile salts broth)	Yersinia enterocolitica	Pr	3 to 5 hari/(25 ± 1) °C	Yersinia enterocolitica	00038^b	–	Kl	>10 koloni pada CIN atau SSDC
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Pseudomonas aeruginosa	00025
				Yersinia enterocolitica	00160
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Pseudomonas aeruginosa	00025
		Sl		Pseudomonas aeruginosa	00025	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
		Sl		Proteus mirabilis	00023	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
RVS (Rappaport-Vassiliadis soya peptone broth)	Salmonella	Pr	(24 ± 3) jam/(41,5 ± 1) °C	Salmonella Typhimurium^d,i	00031	–	Kl	>10 koloni pada XLD atau media lain
				Salmonella Enteritidis^d,i	00030
				+ Escherichia coli^d	00012/ 00013
				+ Pseudomonas aeruginosa	00025
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Inhibisi sebagian ≤100 koloni pada TSA
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	<10 koloni pada TSA
TSPB (Tryptone soya polymyxin broth)	Bacillus cereus	Pr	(48 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Bacillus cereus	00001	–	Kl	>10 koloni pada PEMBA atau MYP
TSPB (Tryptone soya polymyxin broth)	Bacillus cereus	Sl	(48 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0) pada TSA
Media non-selektif cair
BHI (Brain heart infusion broth)	Staphylococci koagulase positif	Pr	(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Staphylococcus aureus	00034	–	Kl	turbiditas (1-2)
Brucella broth	Campylobacter	Pr	2 – 5 hari/(41,5 ± 1) °C atmosfer mikroaerobik	Campylobacter jejuni^d	00156, 00005	–	Kl	turbiditas (1-2)
Brucella broth	Campylobacter	Pr	2 – 5 hari/(41,5 ± 1) °C atmosfer mikroaerobik	Campylobacter coli^d	00004	–	Kl	turbiditas (1-2)
Thioglycollate (Fluid thioglycollate medium)	Clostridium perfringens	Pr	(21 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Clostridium perfringens	00007	–	Kl	turbiditas (1-2)
TSYEB (Tryptone soya yeast extract broth)	Listeria monocytogenes	Pr	(21 ± 3) jam/(25 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 4b^a	00021^b	–	Kl	turbiditas (1-2)
TSYEB (Tryptone soya yeast extract broth)	Listeria monocytogenes	Pr	(21 ± 3) jam/(25 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 1/2a^a	00109	–	Kl	turbiditas (1-2)
Media selektif untuk isolasi
ALOA (Agar Listeria according to Ottaviani and Agosti)	Listeria monocytogenes	Pr	(44 ± 4) jam/(37 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 4b^a	00021^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Pr		Listeria monocytogenes 1/2a^a	00109	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009/ 00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp		Listeria innocua	00017	–	Kl	–
mCCDA^j(Modified charcoal cefoperazone deoxycholate agar)	Campylobacter	Pr	(44 ± 4) jam/(41,5 ± 1) °C atmosfer mikroaerobik	Campylobacter jejuni	00156^b,00005	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Pr		Campylobacter coli	00004	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total atau parsial inhibisi (0-1)
		Sl		Staphylococcus aureus	00034	–	Kl	Total inhibisi (0)
CT-SMAC (Cefixime tellurite sorbitol MacConkey agar)	Escherichia coli O157	Pr	(21 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli O157:H7	00014 (nontoxigenic strain)	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Staphylococcus aureus^d	00032/ 00034	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Parsial inhibisi (1)
CIN SSDC (Cefsulodin, Irgasan novobiocin agar; Salmonella Shigella deoxycholate calcium agar)	Yersinia enterocolitica	Pr	(21 ± 3) jam/(30 ± 1) °C	Yersinia enterocolitica	00038^b,00160	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total atau parsial inhibisi (0-1)
		Sl		Staphylococcus aureus	00034	–	Kl	Total inhibisi (0)
CPC mCPC (Cellobiose polymyxin B colistin agar)	Vibrio spp. selain Vibrio parahaemolyticus/ V. cholerae	Pr	(24 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Vibrio vulnificus	00187^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Pr		Vibrio cholerae non-O1/non-O139	00203^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013/ 00090	–	Kl	Total inhibisi (0)
MYP^j (Mannitol egg yolk polymyxin agar)	Bacillus cereus	Pr	(21 ± 3)-(48 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Bacillus cereus	00001	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl	(44 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp	(44 ± 4) jam/(30 ± 1) °C	Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003	–	Kl	–
PEMBA (Polymyxin pyruvate egg yolk mannitol bromothymol blue agar)	Bacillus cereus	Pr	(21 ± 3)-(44 ± 4) jam/(37 ± 1) °C	Bacillus cereus	00001	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl	(44 ± 4) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp	(44 ± 4) jam/(37 ± 1) °C	Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003	–	Kl	–
SDS (Sodium dodecyl sulfate polymyxin sucrose agar)	Vibrio spp. selain Vibrio parahaemolyticus/ V. cholerae	Pr	(24 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Vibrio vulnificus	00187^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Pr		Vibrio cholerae non-O1/non-O139	00203^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013/ 00090	–	Kl	Total inhibisi (0)
TBX^j(Tryptone bile X-glucuronide agar)	E. coli positif β-d-Glucuronidase	Pr	(21 ± 3) jam/(44 ± 1) °C	Escherichia coli^h	00012^d, 00013^d, 00202^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009, 00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
		Sp		Citrobacter freundii	00006^b	–	Kl	–
		Sp		Pseudomonas aeruginosa	00025	–	Kl	–
TCBS (Thiosulfate citrate bile salts sucrose agar)	Vibrio parahaemolyticus/V. cholerae	Pr	(24 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Vibrio parahaemolyticus	00185^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Pr		Vibrio furnissii	00186^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013/ 00090	–	Kl	Total inhibisi (0)
VRBG^j (Violet red bile glucose agar)	Enterobacteriaceae	Pr	(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b, 00013	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
				Salmonella Typhimurium^d,i	00031
				Salmonella Enteritidis^d,i	00030
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009, 00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
XLD (Xylose lysine deoxycholate agar)	Salmonella	Pr	(24 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Salmonella Typhimurium^d,i	00031	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Pr		Salmonella Enteritidis^d,i	00030	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
		Sl		Escherichia coli^d	00012/ 00013	–	Kl	Total atau parsial inhibisi (0-1)
		Sl		Enterococcus faecalis^d	00009, 00087	–	Kl	Total inhibisi (0)
Media non-selektif untuk isolasi
Nutrient agar^l	Enterobacteriaceae	Pr	(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b,00013	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
	Salmonella		(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Salmonella Typhimurium^d,i	00031
	Salmonella		(24 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Salmonella Enteritidis^d,i	00030
	Yersinia enterocolitica		(24 ± 2) jam/(30 ± 1) °C	Yersinia enterocolitica	00038^b,00160
TSYEA (Tryptone soya yeast extract agar)	Listeria monocytogenes	Pr	(21 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 4b	00021^b	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
TSYEA (Tryptone soya yeast extract agar)	Listeria monocytogenes	Pr	(21 ± 3) jam/(37 ± 1) °C	Listeria monocytogenes 1/2a	00109	–	Kl	Pertumbuhan baik (2)
Media multifungsi
BPW^m(Buffered peptone water)	Pre-enrichment untuk deteksi Salmonella	Pr	(18 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Salmonella Typhimurium^d,i	00031	–	Kl	turbiditas (1-2)
	Pre-enrichment untuk deteksi Salmonella	Pr	(18 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Salmonella Enteritidis^d,i	00030	–	Kl	turbiditas (1-2)
	Pre-enrichment untuk deteksi Enterobacteriaceae	Pr	(18 ± 2) jam/(37 ± 1) °C	Escherichia coli	00012^b,00013	–	Kl	turbiditas (1-2)
				Salmonella Typhimurium^d,i	00031
				Salmonella Enteritidis^d,i	00030
Media referensi untuk enumerasi
Blood agar	Campylobacter	Pr	(44 ± 4) jam/(41,5 ± 1) °C	Campylobacter jejuni^d	00156, 00005	Batch media blood agar yang telah divalidasi	Kn	P_R ≥ 0,7
Blood agar	Campylobacter	Pr	(44 ± 4) jam/(41,5 ± 1) °C	Campylobacter coli^d	00004	Batch media blood agar yang telah divalidasi	Kn	P_R ≥ 0,7
TSAⁿ(Tryptone soya agar)	Hitungan koloni	Pr	Sesuai metode yang menggunakan TSA sebagai media referensi	Bacillus cereus	00001	Batch media TSA yang telah divalidasi	Kn	P_R ≥ 0,7
				Bacillus subtilis subsp. spizizenii	00003
				Escherichia coli	00012
				Listeria monocytogenes 4b^a	00021
				Staphylococcus aureus	00034
SDA (Sabouraud dextrose agar)	Hitungan koloni	Pr	Sesuai metode yang menggunakan SDA sebagai media referensi	Saccharomyces cerevisiae	00058^b	Batch media SDA yang telah divalidasi	Kn	P_R ≥ 0,7
SDA (Sabouraud dextrose agar)	Hitungan koloni	Pr	Sesuai metode yang menggunakan SDA sebagai media referensi	Aspergillus brasiliensis	00053^b	Batch media SDA yang telah divalidasi	Kn	P_R ≥ 0,7
^a 1/2b adalah nama serotype dari Listeria monocytogenes yang umum ditemukan pada pangan dan 4a adalah serotype sebagai penyebab penyakit
^b Strain minimum yang digunakan
^c WDCM (World Data Centre for Microorganism), katalog strain referensi yang dapat ditemui di http://www.wfcc.info (http://refs.wdcm.org)
misal: strain E.coli WDCM 00012 sama dengan ATCC™ 8739; BCRC 11634; CCM 4517; CECT 516; CIP 53.126; DSM 1576; IFO 3972; IMET 11121; LMG 8063; NCDO 904; NCIMB 8545; NCTC 12923;
^d Bebas memilih strain yang digunakan, salah satu strain harus dipilih sebagai penggunaan minimum.
^e Pr: Produktivitas, Sl: Selektivitas, Sp: Spesifisitas
^f Kn: Kuantitatif, Kl: Kualitatif
^g Escherichia coli WDCM 00013 diberikan oleh standar yang spesifik.
^h Escherichia coli WDCM 00013 adalah strain yang memproduksi β-d-glucuronidase secara kuat dan WDCM 00202 memproduksi β-d-glucuronidase secara lemah
ⁱ Beberapa batasan di tingkat nasional mungkin membutuhkan serovar yang berbeda. Pesyaratan nasional tersebut dapat dibuat referensi untuk untuk pemilihan serovar Salmonella.
^j Jika kedua metode kuantitatif dan kualitatif menggunakan media ini, maka hanya hasil uji kuantitatif yang dibutuhkan.
^k Keterangan lebih rinci mengenai kontrol kualitas media MSRV termasuk konsentrasi akhir media dan kriteria dapat dibaca pada metode ISO 6579.
^l Jika NA digunakan untuk dua atau tiga aplikasi yang berbeda, maka uji pertumbuhan Salmonella dapat dijadikan pesyaratan minimum (jika laboratorium menguji mikroorganisme ini).
^m Jika BPW digunakan untuk dua atau tiga aplikasi yang berbeda, maka uji pertumbuhan enrichment Salmonella dapat dijadikan pesyaratan minimum (jika laboratorium menguji mikroorganisme ini).
ⁿ Strain dapat dipilih berdasarkan metode yang menggunakan TSA sebagai media referensi.

Tabel diatas merupakan penjelasan secara khusus untuk setiap jenis media. Namun, secara umum parameter dan metode yang dipilih untuk dilakukan dalam pengecekan kinerja berdasarkan kelompok media dapat dilihat pada Tabel 3.

Tabel 3. Parameter beserta metode yang diuji untuk jaminan kualitas berdasarkan kelompok media. Diadaptasi dari “ISO 11133: 2014 Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and performance testing of culture media”, oleh ISO, 2014, Annex J.

Media	Parameter	Metode
media cair selektif enumerasi	produktivitas	kuantitatif
media cair selektif enumerasi	selektivitas	kualitatif
media padat selektif enumerasi	produktivitas	kuantitatif
	selektivitas	kualitatif
	spesifisitas	kualitatif
media cair selektif pengaya	produktivitas	kualitatif
media cair selektif pengaya	selektivitas	kualitatif
media padat selektif deteksi	produktivitas	kualitatif
	selektivitas	kualitatif
	spesifisitas	kualitatif
media padat non-selektif enumerasi	produktivitas	kuantitatif
media cair non-selektif pengaya	produktivitas	kualitatif
media padat non-selektif deteksi	produktivitas	kualitatif

Indra Pradhika, 2018

Referensi :

APHA, AWWA & WEF Standard method for examination of water and wastewater 9020: Quality Assuance / Quality Control. (2005).

ISO 11133: 2014 Microbiology of food, animal feed and water — Preparation, production, storage and performance testing of culture media. (2014).

2 Comments

rahajeng ariesta Reply

01/10/2020 at 04:52

selamat pagi pak…
ada yangmau saya tanyakan berkaitan dengan nilai PR pada tabel produktivitas media…
apakah rumusnya jumlah koloni yg tumbuh pada media uji dibandingkan dengan jumlah mikroba yang tumbuh pada media TSA?apakah rumusnya sama antara satu mikroba dengan mikroba lainnya selalu dibandingkan dengan jumlah mikroba tsb yang tumbuh pada media TSA?jika benar kenapa TSA yang dijadikan patokan?terimakasih atas waktu yang anda luangkan untuk menjawab pertanyaan saya ini…
- indrapradhika Reply
  
  01/15/2020 at 11:48
  
  apakah rumusnya jumlah koloni yg tumbuh pada media uji dibandingkan dengan jumlah mikroba yang tumbuh pada media TSA?
  jawab : iya
  misal untuk menghitung produktivitas media padat
  Pr = Ns/No
  Pr = Productivity ratio
  Ns= Jumlah koloni pada medium uji
  No = Jumlah koloni pada medium referensi (misal :TSA)
  penjelasan selanjutnya ada pada :
  “pengujian-kinerja-media-padat”
  
  apakah rumusnya sama antara satu mikroba dengan mikroba lainnya selalu dibandingkan dengan jumlah mikroba tsb yang tumbuh pada media TSA?
  jawab : tidak selalu TSA, medium ref sudah ditentukan sesuai tabel. misalnya medium ujinya mCCDA, medium ref nya blood agar
  
  jika benar kenapa TSA yang dijadikan patokan?
  jawab : umumnya medium yang jadi patokan (ref) adalah medium yang sudah dikenal karakternya terlebih dahulu untuk jenis terkait atau yang telah divalidasi sebelumnya.
  
  tambahan:
  pengujian produktivitas media padat secara kuantitatif dapat dilihat pada pstingan terkait.
  sedangkan pengujian produktivitas, selektivitas, spesifisitas media cair dll. sesuai tabel yang ditanyakan terdapat pada buku yang telah diteribitkan diatas.
  terimakasih.

Laboratorium Mikrobiologi Standar

Jaminan Kualitas Media

1. Pegecekan sterilitas media

2. Pengujian kinerja media

2 Comments

Leave a Reply Cancel reply